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【新海法医专场】灵敏度,你理解对了么?
2022-11-21 13:51:51

案件试剂盒灵敏度

灵敏度是我们在评价一款试剂盒时候,绕不开的一个性能指标。特别是在STR剂盒中,灵敏度的重要性不言而喻。但是灵敏度究竟如何定义?不同反应体系下的灵敏度变化又如何去理解?今天,就让我们一起探讨一下。


首先,我们先来看一下灵敏度的定义:

GB/T 37226-2018《法庭科学人类荧光标记STR复合扩增检测试剂质量基本要求》2.9中定义了灵敏度(sensibility)的概念:试剂在推荐条件下,试剂成功检出所含全部基因座DNA分型的最小DNA样本量。
这个概念与YY/T 1789.3-2022《体外诊断检验系统性能评价方法第3部分:检出限与定量限》中定义的最低检出限(limit of Detection, LoD)有点类似。
灵敏度是对于低浓度水平样本而言,其DNA分型被完整、准确检测出来的基础。所以在试剂盒开发过程中,往往采用标准DNA进行灵敏度的评估和验证。
目前来说,大部分STR试剂盒对外宣称的灵敏度在0.125ng或0.0625ng。



但其实这是一个很模糊的描述。


第一,不同的反应体积下的灵敏度是不相同的。同款试剂盒,10μL反应体系就会比25μL反应体系的灵敏度更高。例如:VerifilerPlus在25μL体系下的灵敏度为0.125ng,但在10μL体系下可以做到0.05ng左右。

第二,灵敏度的定义是需要基于一定的重复数量和检出概率上的。一般情况下,体外诊断试剂的LoD是指测量结果超过95%检出的最低样本量,即重复20次,有19次以上成功检出的最低样本量,偶发性的实验结果不能被采纳为LoD。


新海观点


因此,新海认为,一款STR试剂盒的灵敏度的验证需要基于一定的重复实验(20次)和成功概率。我们在描述灵敏度的指标时,应该增加对应的反应体系。比如,针对某STR试剂盒,使用25μL体系,进行20次重复实验,所有基因座完全检出的概率大于95%的最低样本量为0.125ng。所以该试剂盒在25μL反应体系的灵敏度为0.125ng。

最后,别忘记,验证灵敏度的标准DNA应事先进行定量。如果标准DNA浓度不准确,则灵敏度的指标也会不准确

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