做试剂的都知道,灵敏度高是好事。我们的NHID® 25A案件试剂盒,微量样本检出能力直接拉满,脱落细胞、接触类检材,低模板量也能把位点抠出来。
但问题跟着来了——灵敏度太高,常量样本不做调整非常容易渗透。
日常案件里,血迹、精斑、烟蒂,扩增不做调整,浓度一高,峰图直接炸。渗透、平头峰、内标报废,数据没法用。
实验室反馈回来:微量效果非常好,但是常量样本有些头疼。
微量样本重要吗?当然重要。现场就那么几个接触类检材,检出就是突破口。
但在实验室的桌面上,微量样本占比并不算高。每天堆着的,大部分是常量样本。这意味着,灵敏度越高,日常重做的概率反而越大。
传统PCR技术就卡在这儿:灵敏度和常量适应性是跷跷板。一头翘起来,另一头必然掉下去。要么保微量,常量经常炸;要么保常量,微量经常丢。一根筋变两头堵。
24年的某天,讨论会上有人开了句玩笑话:
"公司2007年成立,明年18岁了,都成年人了,为什么我们只能二选一?不能全都要吗?"
对!为什么我们不能全都要呢?
PCR模型里,模板量差100倍,产物量就差100倍,同一套程序不可能微量常量两头顾。
要破局,得让PCR体系自己长"脑子"。
技术团队转换思路:改造DNA聚合酶,让它对产物更敏感;重构Buffer体系,扩增反应自动"踩刹车"——高浓度模板时,产物累积到阈值后,自我抑制,不再指数增长。低浓度模板时,产物少,触发不了抑制,正常跑到终点。
最终验证下来,同一管试剂,同一套循环:
5ng常量样本,体系自动封顶,信号稳在安全线以下,不炸峰、不渗透;
0.05ng微量样本,抑制没触发,正常指数扩增,该出的位点一个不漏。
不用减循环防渗透,不用加循环保检出。同一个程序,常量微量两头都能顾!
以前觉得,常量微量不可兼得是PCR的"天道"。要么牺牲灵敏度保常量,要么牺牲常量适应性保微量。
NHID® 25A(宽域版)证明,思路打开,"天道"是可以改写的。
在我们的努力下,PCR从"油门焊死"变成了"智能驾驶"。