PCR试剂添加物(抗污染 常温50度)

NuHi® E.coli UNG 货号:NH9006
临床检测PCR试剂添加物(抗污染 常温50度)
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原理

PCR是一种极敏感的扩增技术,易受污染的影响。小量的外源 DNA 污染可以与目的模板一块被扩增。当前一次扩增产物用来进行新的扩增反应时,会发生共同来源的污染。从其他样品中纯化的 DNA 或克隆的 DNA 也会是污染源。卫生部已经明确规定,凡是用于临床检验的PCR试剂,都应该有UNG酶技术,以防止污染。


以dUTP取代dTTP,使得PCR产物都含有dU的DNA链。在PCR开始前增加20-25℃的保温步骤,UNG酶即可将反应体系中已有的U-DNA污染物中的尿嘧啶碱基降解,并在随后变性的条件下DNA链断裂,消除由于污染DNA产生的扩增,从而保证扩增结果的特异性,准确性。同时UNG酶在95℃被灭活,不会再降解新扩增的产物U-DNA。从而达到去除PCR污染的目的。

产品介绍

NuHi® E.coli UNG,分子量25.7KD,比活大于500,000U/mg。在50℃时即可表现出高活性。使用过程中不需额外添加辅助因子或者二价金属离子。该酶在绝大多数的PCR buffer中都可表现出活性。

适合的pH范围7.0-8.5。活力最适条件是pH7.550mM NaCl

活力单位定义

37℃条件下,30分钟能够释放1nmol尿嘧啶所需要的酶量,定义1U

质量控制

纯度大于99%;无核酸外切酶活性;每单位UNG可以去除105个拷贝的dU污染。

使用方法:

(1) PCR开始前加入1U NuHi® E.coli UNG到反应混合液中。

(2) 50℃孵育5min

(3) 95℃加热10min灭活(可与PCR运行程序中高温变性步骤同时进行)。

(4) 进行 PCR运行程序。

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基因来源大肠杆菌重组蛋白

产品规格:1U/ul,200U/管,1000U/管

保存溶液:50mM Tris-HCl pH7.525℃), 50mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% glycerol

保存条件:-20